采用手性固定相或添加了手性試劑的流動(dòng)相�(jìn)行手性異�(gòu)體(�(duì)映體)分離的色譜技�(shù)。液相色譜和氣相色譜都可以�(jìn)行手性異�(gòu)體分�。它利用手性固定相或手性流�(dòng)相中的手性試劑與被測(cè)手性異�(gòu)體分子的空間和特異相互作用的差異,將�(duì)映體拆分�。手性色譜在生物和醫(yī)藥領(lǐng)域具有重要應(yīng)用�
化合物中某�(gè)碳原子上連接4�(gè)互不相同的基�(tuán)�(shí),該碳原子被稱為手性碳原子或手性中心,分子中含有手性中心的藥物稱為手性藥��
手性藥物一般用左旋體(levorotatory)或右旋體(dextrotatory)表�,左旋體在藥物名稱前冠l-或(一�-;右旋體冠d-或(+�-;左旋體和右旋體的等量混合物稱為外消旋體(recemate�,名稱前冠(dl�-或(±�-。對(duì)于糖類、氨基酸等立體化�(xué)�(gòu)�,也可以用D型和L型表�;按照手性中心連接取代基原子序�(shù)排列順序,也有用R�、s型表示的�
目前臨床�(yīng)用的手性藥物中,除天然和半合成藥物�,人工合成的手性藥物仍以外消旋體為�。然而在外消旋體藥物中各�(duì)映體間的藥效�(xué),藥�(dòng)�(xué)以及毒性常有很大差異。很多情況是一種對(duì)映體有活�,而另一種沒有或活性很�,甚至有較大毒�。因此有必要研究建市快�、準(zhǔn)�、靈�、簡便的分離分析�(duì)映體藥物的方法�
手性藥物分離方法很�,其原理大都是將�(duì)映體的混合物�(zhuǎn)換成非對(duì)映體異構(gòu)體,然后再利用它們理化性質(zhì)上的差異使之分離。主要可分為兩大�,即色譜法與非色譜法。非色譜法主要有�(jié)晶法,也包括微生物或酶消化法。但是這些方法耗時(shí)較長,過程復(fù)�,純度較�,且難于�(jìn)行微量分離和�(cè)定,具有局限�。色譜法成為目前手性藥物分離分析的主要方法,包括薄層色�、氣相色譜、高效液相色�、超臨界流體色譜和毛�(xì)管電泳等�
手性固定相(CSP)可直接與對(duì)映體作用生成�(wěn)定性不同的�(fù)合物,導(dǎo)致兩�(duì)映體的色譜行為產(chǎn)生差異,從而達(dá)到分離的目的。目前市售的手性固定相�100多種,按其在分離過程中與�(duì)映體相互作用的類型可分吸附型、模擬酶�(zhuǎn)移型、電荷轉(zhuǎn)移型、配體轉(zhuǎn)換型�;按固定相材�,分為Pirkle�、蛋白質(zhì)�、氨基酸�、纖維素�、環(huán)糊精�、冠醚類、聚酰胺�、聚氨酯類等。CSP法適合于不含活潑反應(yīng)基團(tuán)的化合物。制備分離方�,定量準(zhǔn)��
指在流動(dòng)相中加入手性添加劑,使其與待測(cè)物形成非�(duì)映體�(fù)合物。根�(jù)其穩(wěn)定常�(shù)的不同而分�。手性添加劑有:
1、環(huán)糊精類試�
其手性識(shí)別主要來自環(huán)�(nèi)腔對(duì)芳烴或脂肪烴�(cè)鏈的包合作用及環(huán)外殼上的羥基與藥物對(duì)映體�(fā)生氫鍵作�。環(huán)糊精分為α、�、γ三種類�,其空腔大小作用不同。�-�(huán)糊精適合于相�(duì)分子�(zhì)量較小的�(duì)映體分析;�-�(huán)糊精�(duì)形成包合物有大小的空腔,適合于多�(shù)�(duì)映體的位阻和電子特征,應(yīng)用廣�;�-�(huán)糊精則適合于較大分子�(duì)映體分析�
2、手性離子對(duì)試劑
荷電藥物能與手性離子對(duì)締合成電中性配合物,即離子�(duì)與固定相作用,其保留特征取決于離子對(duì)濃度和種�,同�(shí)亦受外加的手性配位劑控制。常用的手性離子對(duì)試劑有奎�、奎尼丁等。本法適用于正相色譜,固定相可為硅膠、氰基丙基硅膠等,多用于有機(jī)酸堿的分�
3、配基交換型添加�
配基交換原理是在流動(dòng)相緩沖溶液中加入金屬離子和配位體交換�,形成二元配合物,藥物對(duì)映體再與其形成穩(wěn)定性不同的三元配合物而達(dá)到手性分�。配給交換系�(tǒng)使用水性流�(dòng)�。若在流�(dòng)相中加入有機(jī)改性劑(如甲酸、乙腈等�,可使疏水性藥物保留時(shí)間減�,提高分離度。常用的手性配合試劑多為氨基酸及其衍生�,如L-脯i氨酸等。配位金屬離子有Cu2+、Zn2+等。用于分離氨基酸及其衍生�、氨基醇、多巴胺�。CMP法優(yōu)�(diǎn)是不必柱前衍生化,對(duì)固定相也無特定要求,樣品的非�(duì)映異�(gòu)化配合物具有可逆�,簡便、經(jīng)�(jì)、易��
�(duì)于某些不宜直接分離的藥物,可使對(duì)映體與手性試劑反�(yīng),生成相�(yīng)的非�(duì)映異�(gòu)體對(duì)。其過程可表示為�
式中SE為光活性試�,也稱“選擇器�;SA為手性溶�(zhì),也稱“選擇靶��
本法特點(diǎn)是:
?、傩枰吖鈱W(xué)純度的手性衍生化試劑�
?、谑中栽噭┖头磻?yīng)�(chǎn)物實(shí)�(yàn)條件下穩(wěn)��
?、鬯幬飳?duì)映體�(jié)�(gòu)中應(yīng)具有可供衍生化的官能�(tuán)�
?、芊�?yīng)�(chǎn)物要有較高的分離效率�
⑤手性試劑應(yīng)具有UV或熒光等敏感的結(jié)�(gòu)�
常用的手性衍生化試劑有:
①羧酸衍生物�,如酰氯、磺酰氯、氯甲酸酯等是可與胺、N一氨基酸和醇類反應(yīng)生成非對(duì)映異�(gòu)化衍生物�
②胺�,一般要求其�(yīng)具有苯環(huán)、萘�(huán)、蒽�(huán)�(jié)�(gòu),以提高檢測(cè)的靈敏度。主要用于羧酸基、氨基酸、醇和芳基丙酸類非甾體抗炎藥物、類萜酸��
?、郛惲蚯杷狨ズ彤惽杷狨ヮ?,如苯乙基異氰酸酯(PEIC�、萘乙基異氰酸酯(NEIC)等,可與大多數(shù)醇類及胺類化合物反應(yīng)生成氨基甲酸酯類和脲的DSTM而被分離,廣泛用于氨基酸及其衍生�、兒茶酚胺類、苯丙胺�、麻黃堿類、醇�、腎上腺素拮抗劑等藥物的分離分析�
?、芄鈱W(xué)活性氨基酸�,光�(xué)純氨基酸及其衍生物是最早使用的色譜手性試劑,廣泛用于�、羧酸及醇類藥物,尤其總氨基酸類化合物的手性分雀�