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反相高效液相色譜
閱讀�9673�(shí)間:2018-06-05 10:33:28

反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流�(dòng)相所組成的液相色譜體�,它正好與由極性固定相和弱極性流�(dòng)相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠,典型的流動(dòng)相是甲醇和乙�。RP-HPLC是當(dāng)今液相色譜的最主要的分離模式,幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有�(jī)物的分離� 反相色譜法適于分離非極�、極性或離子型化合物,大部分的分析任�(wù)皆由反相色譜法完��

定義

  反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流�(dòng)相所組成的液相色譜體�,它正好與由極性固定相和弱極性流�(dòng)相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠,典型的流動(dòng)相是甲醇和乙�。RP-HPLC是當(dāng)今液相色譜的最主要的分離模式,幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有�(jī)物的分離。反相色譜法適于分離非極�、極性或離子型化合物,大部分的分析任�(wù)皆由反相色譜法完��
  反相高效液相色譜是化�(xué)鍵合相色譜法的一�。化�(xué)鍵合相色譜法是由液液色譜法發(fā)展起�(lái)�,是為了解決在分離�(guò)程中,�(jī)械吸附在載體上的固體液的流失�(wèn)題而發(fā)展出�(lái)的一種新方法。鍵合相色譜法通過(guò)將不同的有機(jī)官能�(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到硅膠載體表面的游離�(jīng)基上,而生成化�(xué)鍵合固定�,化學(xué)鍵合固定相對(duì)各種極性溶�
  都有良好的化�(xué)�(wěn)定性和熱穩(wěn)定�。由它制備的色譜主柱效高、使用壽命長(zhǎng)、重�(xiàn)性好,幾乎�(duì)各種類型的有�(jī)化合物都呈現(xiàn)良好的選擇�,并可用于梯度洗脫操作,消除了分配色譜法的缺�(diǎn)�
  根據(jù)鍵合固定相和流動(dòng)相相�(duì)極性的�(qiáng)�,可將鍵合色譜法分為正相鍵合色譜法和反相鍵合色譜法.反相鍵合色譜法即反相高效液相色譜.在正相鍵合色譜法�,鍵合固定相的極性大于流�(dòng)相的極�,適用于分離油溶性或水溶性的極性和�(qiáng)極性化合物.在反相鍵合相色譜法中,鍵合固定相的極性小于流�(dòng)相的極性適用于分離非極性、極性或離子型化合物,其應(yīng)用范圍也比正相鍵合相色譜法更廣泛�

原理

  在反相鍵合相色譜法中使用的是非極性鍵合固定相。它是將全多�(或薄�)微粒硅膠載體,�(jīng)酸活化處理后與含輕基�(c4、C8、C18)或苯基的硅烷化試劑反�(yīng),生成表面具有烷基或苯基的非極性固定相。如共價(jià)�(jié)合到載體上的直鏈�?xì)浠衔镎粱�?。關(guān)于反相色譜的分離�(jī)�,吸附色譜的作用機(jī)制認(rèn)為溶�(zhì)在固定相上的保留主要是疏水作�,在高效液相色譜中又被稱為疏溶劑作�。根�(jù)疏溶劑理�,�(dāng)溶質(zhì)分子�(jìn)入極性流�(dòng)相后,即占�(jù)流動(dòng)相中相應(yīng)的空�,而排擠一部分溶劑分子。當(dāng)溶質(zhì)分子被流�(dòng)相推�(dòng)與固定相接觸�(shí),溶質(zhì)分子的非極性部分或非極性因子會(huì)將非極性固定相上附著的溶劑膜排擠開(kāi),而直接與非極性固定相上的烷基官能�(tuán)相結(jié)�(吸附)形成締合�(luò)合物,�(gòu)成單分子吸附�。這種疏溶劑的吸附作用是可逆的,�(dāng)流動(dòng)相極性減少時(shí),這種疏溶劑斥力下�,�(huì)�(fā)生解�,并將溶質(zhì)分子解放而被洗脫下來(lái)�

�(yīng)�

  工業(yè)生產(chǎn)中的�(yīng)�
  隨著技�(shù)的不斷改�(jìn),反相高效液相色譜法獲得日益廣泛的�(yīng)�,在高效液相色譜法中也占有重要的地�。自冬梅等人提出了一種利用反相高效液相色譜法分析米根霉乳酸發(fā)酵液中有�(jī)酸的方法。應(yīng)用反相認(rèn)值kosil一11SC18RS色譜�,�0.olmol/L磷酸P(H2.5)作為流動(dòng)�,�(fā)酵液�(jīng)稀硫酸�(yù)處理后直接�(jìn)樣分離定�,�10mni�(nèi)把其中的乳酸、蘋果酸、富馬酸等完全分離定�,各種酸回收率大于97%�
  其實(shí)�(yàn)�(jié)果證�,該方法能將米根霉乳酸�(fā)酵液中乳酸、蘋果酸和富馬酸完全分離并準(zhǔn)確定�。本方法具有前處理簡(jiǎn)�、干擾小、靈敏度�、分析速度快等�(yōu)�(diǎn),�(duì)于及�(shí)�(cè)定乳酸發(fā)酵過(guò)程的變化具有重要意義,是測(cè)定乳酸發(fā)酵液中各有機(jī)酸的快�、有效的定量�(cè)定方��
  藥代�(dòng)力學(xué)中的�(yīng)�
  高效液相色譜在藥物代謝動(dòng)力學(xué)上的研究主要是為藥物代謝�(dòng)力學(xué)軟件提供�(shù)�(jù),并最終通過(guò)藥代�(dòng)力學(xué)軟件處理得到藥物�(dòng)力學(xué)�(jié)�。其中動(dòng)力學(xué)參數(shù)主要集中�:吸收半衰�(tl/2�)、消除半衰期(t1126)、達(dá)峰時(shí)(tma)、血藥濃�(Cmax)、曲線下面積AUC、消除率CIB、表觀分布容積Vd�。通過(guò)這些�(dòng)力學(xué)參數(shù)�(duì)藥物代謝�(dòng)力學(xué)�(jìn)行研�,并通過(guò)這種方法�(duì)藥物�(duì)�(jī)體的作用情況�(jìn)行比�,有利的指�(dǎo)藥物的開(kāi)�(fā)和研�,在這�(gè)方向的研究可能是高效液相色譜與藥代動(dòng)力學(xué)軟件�(lián)用分析的�(fā)展方��

影響溶質(zhì)保留值的三�(gè)因素

  烷基鍵合固定相對(duì)每種溶質(zhì)分子締合作用和解締作用能力之�,就決定了溶質(zhì)分子在色譜過(guò)程的保留值。以下簡(jiǎn)述影響溶�(zhì)保留值的三�(gè)因素:
  1)溶�(zhì)分子�(jié)�(gòu)
  在反相鍵合相色譜法中,溶質(zhì)的分離是以它們的疏水�(jié)�(gòu)差異為依�(jù)�,溶質(zhì)的極性越�,疏水性也�(qiáng),保留值越�。根�(jù)疏溶劑理�,溶質(zhì)的保留值與其分子中非極性部分的總表面積有關(guān),其與烷基鍵合固定相結(jié)出的面積愈人,保留值越大�
  2)烷基鍵合固定相的特�
  烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性作用表�,因此鍵合到硅膠表面的烷基�(shù)量就決定著溶�(zhì)容量因子的大�。烷基的疏水特性隨碳鏈的加�(zhǎng)而增�,溶質(zhì)的保留值也隨著烷基碳鏈�(zhǎng)度的增加而增�。隨著烷基碳鏈的增長(zhǎng),增加了鍵合相的非極性作用的表面�,其不僅影響溶�(zhì)的保留�,還影響色譜柱的選擇�,即隨烷基碳鏈的加�(zhǎng)其對(duì)溶質(zhì)分離的選擇性也增大�
  3)流動(dòng)相性質(zhì)
  流動(dòng)相的表面張力愈大,介電常數(shù)愈大,其極性越�(qiáng),此時(shí)溶質(zhì)與烷基鍵合相得締合能力越�(qiáng),流動(dòng)相的洗脫�(qiáng)度弱,�(dǎo)致溶�(zhì)的保留值越��

維庫(kù)電子�,電子知�(shí),一查百��

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