分子排阻色譜法又稱空�排阻色譜法(SEC)是利用多孔凝膠固定相的�(dú)特性產(chǎn)生的一�,主要根�(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團(tuán)尺寸間的相對�(guān)系而對溶質(zhì)�(jìn)行分離的分析的方�。分子排阻色譜又叫凝膠色譜法�
凝膠過濾色譜�-GFC(采用水溶液或緩沖液作為流動(dòng)相)和凝膠滲透色譜法-GPC(采用有�(jī)溶劑作為流動(dòng)相)
適用于對未知樣品的探索分�,它能很快提供樣品按分子大小組成的全面情�,并迅速判斷樣品是簡單的還是復(fù)雜的混合合物,并提供樣品中各組分的近似分子量。這種分離方法不宜用于分子大小組成相似或分子大小僅�10%的組分分�,如同分異構(gòu)體的分離不宜用分子排阻色譜法�
1、主要取決于凝膠的孔徑大小與被分離組分分子尺寸之間的�(guān)�,與流動(dòng)相的性質(zhì)沒有直接的關(guān)��
2、樣品分子與固定相之間不存在相互作用,色譜固定相是多孔性凝�,僅允許直徑小于孔徑的組分�(jìn)�,這些孔對于溶劑分子來說是相當(dāng)大的,以致溶劑分子可以自由的�(kuò)散出入。樣品中的大分子不能�(jìn)入凝膠孔洞而完全被排阻,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,首先從柱中被流動(dòng)相洗脫出�;中等大小的分子能�(jìn)入凝膠中一些適�(dāng)?shù)目锥�?,但不能�(jìn)入更小的微孔,在柱中受到滯留,較慢地從色譜柱洗脫出來;小分子可�(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞,在柱中受到更強(qiáng)的滯�,會(huì)更慢的被洗脫�;溶解樣品的溶劑分子,其分子量最�,可�(jìn)入凝膠的所有孔�,從柱中流出,從而實(shí)�(xiàn)具有不同分子大小樣品的完全分�。在分子排阻色譜法中,溶劑分子從柱中流出,這一�(diǎn)明顯不同于其他液相色譜法�
3、在SEC中,不同尺寸樣品分子的分布系�(shù)K總保持在0~1之間。K=0說明溶質(zhì)完全被排除在填料孔外,稱為全排斥,即填料的排斥極�;K=1說明溶質(zhì)可完全�(jìn)入填料孔�(nèi)。稱為全滲�,即填料的滲透極限�
4、對與某一大小分子其洗脫一體積等于流動(dòng)相體積與該尺寸溶�(zhì)可以滲透�(jìn)入空洞內(nèi)部的那部分體積的總和。Ve=Vo+KVp
固定相:凝膠按機(jī)械強(qiáng)度分軟質(zhì)凝膠(葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠�;半剛性凝膠(苯乙�-二乙烯基苯共聚物�;剛性凝膠(高交�(lián)度苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、多孔球形硅�、羥基化聚醚多孔微球�。按化學(xué)性質(zhì)分有�(jī)凝膠(均勻凝膠、半均勻凝膠、非均勻凝膠�;無�(jī)凝膠(非均勻凝膠��
流動(dòng)�
凝膠滲透色譜法:常用四氫呋喃三氯乙�
凝膠過濾色譜法:以水為主�,具有不同PH值得多種緩沖溶液,所有溶劑使用前均要以微孔濾膜或5號砂芯漏斗過�。除此之�,還需根據(jù)所分離的化合物性質(zhì)向流�(dòng)相中加入一些添加劑以改善保留和分離效果。如�(dāng)使用親水性有�(jī)凝膠作為固定相時(shí),為消除體積排阻色譜法中不希望存在的吸附作用與基體的疏水作用,通常在流�(dòng)相中加入少量的無�(jī)�,以維持流動(dòng)相的離子�(qiáng)度在0.1�0.5,減少副作用�