暗場顯微鏡技�(shù)是利用斜射照明法阻擋透過�(biāo)本細(xì)節(jié)的直射光,以反射光和衍射光來觀察標(biāo)本。在普通顯微鏡下直射光透過�(biāo)本的�(shí)�,一部分光被吸收,另一部分光透射或折�,形成標(biāo)本細(xì)節(jié)�(nèi)部結(jié)�(gòu)的真�(shí)投影。因此,在普通顯微鏡下所看到的是物體形態(tài)和結(jié)�(gòu)。而在暗場顯微鏡下從側(cè)面照射到物體的光�,繞射或反射造成物體外形的側(cè)�。因此暗場顯微鏡下所看到的只是物體的輪廓或物體的�(yùn)�(dòng)� 普通顯微鏡下可以看�0.45um的細(xì)節(jié),而暗場顯微鏡下竟能看�0.2-0.004um的極徽小物體。這�(gè)范圍的物體叫亞粒�,因此暗場顯微鏡也可以稱裂隙限外顯微鏡�
暗場顯微鏡特別適用于膠體化學(xué)�(lǐng)域中觀察溶�(zhì)粒子的布朗運(yùn)�(dòng),適用于觀察原�、細(xì)菌的鞭毛、偽足運(yùn)�(dòng),醫(yī)�(xué)檢驗(yàn)�(xué)范圍適用于觀察人體體液中螺旋�、尿管形、結(jié)晶或各種粒子.在這一�(diǎn)�,暗場顯微鏡�(yuǎn)比其他種類顯微鏡要得��
暗場顯微鏡的�(guān)鍵部件是暗場聚光鏡�
1 拋物面聚光鏡
拋物面玻璃球體的上下兩端平行切削而成的拋物面聚光�.在它下面中央的沉淀擋光薄膜,只允許其周邊入射的照明光束.該光束在球體的拋物面上反射并會聚到標(biāo)本上.
2 心形聚光�
將光�(xué)材料切削成球面反射系�(tǒng),并以中光膜阻擋直射光的聚光鏡為心形聚光��
3 同心球面聚光�
利用兩�(gè)球面的同一中心制造的聚光�,基本原理都相同。這種聚光鏡不涂中心擋光金屬薄�,只以球面反射面阻擋中心直射光束
暗場觀察時(shí)不能使用油浸系或水浸系物�,而用干燥系物鏡中鏡口率在0.85以下的物�。假如使用鏡口率過大的物鏡時(shí),除微粒子反射的光束以外的旁射光束也可�(jìn)入物鏡前透鏡.就是這種放大率并不大的物鏡下,可以達(dá)到觀察亞微粒子的要求。Zeiss公司出售的帶有孔欄的物鏡適合于此種用�。具體操作如��
1.安裝暗場聚光器檢查聚光器的光�(并非晶體光軸而指幾何光學(xué)光軸)是否與顯微鏡的光路一致。聚光鏡用中心調(diào)節(jié)旋鈕合軸�(diào)整之�,圈錐光束的交點(diǎn)集中到標(biāo)本平面上�
2.放標(biāo)本放置標(biāo)本時(shí)在聚光鏡前透鏡與載物片之間必須浸油。否則來自標(biāo)本細(xì)節(jié)的反射光和衍射光束在載物玻片表面�(jìn)行全反射。觀察結(jié)果趨于失敗�
3.�(diào)節(jié)聚光鏡焦�(diǎn)操縱光源會聚透鏡�(wù)使圓錐形光束的交�(diǎn)照射到標(biāo)本平面上�
4.迭擇物鏡用于暗場觀察的物鏡�.油浸系或水浸系的物鏡不能使用。就是干燥系物鏡中也要挑選鏡率在0.85以下為好。Zeiss廠出售的本身帶有可調(diào)光欄的物鏡為適用。如果物鏡鏡口率過大�(shí),來自聚光鏡的部分直射光束�(jìn)入物鏡前透鏡,從而干擾暗視野成像效應(yīng)。如果使用油浸系物鏡觀察時(shí),必須調(diào)節(jié)物鏡�(nèi)裝孔徑光��
5.光派的選擇暗場顯微鏡中光能損失太大。因此必須選擇光�(qiáng)大的光源,才能取得較好效果。尤其以超聚光鏡觀察膠體微粒運(yùn)�(dòng)�(shí),光�(qiáng)愈大愈好.
6.浸油的方法聚光鏡與載玻片間浸油時(shí)特別注意是否有氣泡。氣泡可招致暗視野觀察效果的完全破壞