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酶標儀
閱讀�4296時間�2017-06-17 14:55:10

    即酶�(lián)免疫檢測儀是酶�(lián)免疫吸附試驗的專用儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析� 測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下,用一�光電比色�無法完成測試,因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求�

原理

    酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計,其基本工作原理與主要結(jié)�(gòu)和光電比色計基本相同. 圖示是一種單通道自動進樣的酶標儀工作原理�.光源燈發(fā)出的光波�(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標�.該單色光一部分被標本吸�,另一部分則透過標本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大,對�(shù)放大,模�(shù)�(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行�(shù)�(jù)處理和計�,由顯示器和打印機顯示結(jié)�. 微處理機還通過控制電路控制機械�(qū)動機�(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔�,從而實�(xiàn)自動進樣檢測過程.而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測,因此省去了X,Y方向的機械驅(qū)動機�(gòu)和控制電�,從而使儀器更小巧,結(jié)�(gòu)也更簡單.
    微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測樣本的透明塑料�,板上有多排大小均勻一致的小孔,孔�(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.
    光是電磁波,波長100nm�400nm稱為紫外��400nm�780nm之間的光可被人眼觀察到,大�780nm稱為紅外�。人們之所以能夠看到色彩,是因為光照射到物體上被物體反射回�。綠色植物之所以是綠色,是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光,但對綠色不吸收,反射出�,所以植物呈�(xiàn)為綠�。酶標儀測定的原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光��
    隨著檢測方式的發(fā)�,擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀,可檢測吸光度(Abs)、熒光強�(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)�(fā)光(Lum)�
    酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍�(nèi)的任意波�,而濾光片型酶標儀則根�(jù)選配的濾光片,只能截取特定波長進行檢測�
    檢測單位
    光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量�(guān)��
    檢測單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度� OD=log�1/trans),其中trans為檢測物的透光�。根�(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述�(guān)系:
    E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測物之前的光強�,Ι為從被檢測物出來的光強度�
    OD值由下述公式計算�
    c為檢測物的濃� b為檢測物的厚� a為摩爾因�
    在特定波長下測定每一種物�(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長�,就會造成檢測�(jié)果的不準�。因此,在測定檢測物�,我們選擇特定的波長進行檢測,稱為測量波��
    但是每一種物�(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸�,為了消除這種非特異性吸�,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準確�。在參照波長下,檢測物光的吸收最�。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸��
    檢測值計�
    儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進位�(shù)字信號,�4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%,沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中,檢測物的透光值均� 0%一100%之間。透光�
    的計算如下:
    T=(Meas—Min�/(Max—Min�
    其中T為透光�� Meas為檢測的二進位�(shù)�� Min為在 0%的情況下檢測的二進位�(shù)值, Max為在100%的情況下檢測的二進位�(shù)�,舉例如下:
    MaX=3600
    Min=20
    Meas=30
    T=�30-20�/3600-20)=0�0028
    OD=log�1/T�=log�1/0.0028�=2.552
    中心定位
    儀器會自動對酶標孔進行中心定位,中心定位是要消除酶標孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準�。在對每一個酶標儀進行檢測�,儀器其實要進行35個點的測�,選取最中間�5個點的均值為本孔的OD��
    光源的參照通道
    參照通道是用來校準由于電壓不�(wěn)或燈泡磨損帶來的影響�

用途和其它提示

    用于ELISA試劑的測�,廣泛用于各種實驗室,包括臨床實驗室�
    �(zhì)量控�
    �(zhì)量控制是試劑檢測的重要因�。請按照試劑說明書的要求進行�(zhì)量控��
    空白校正
    有一些試劑盒的說明書將空白孔�(shè)置為空氣,其它大多數(shù)空白孔的�(shè)置是用試劑來�(shè)置的,請按照試劑盒的說明書要求進行�
    檢測�(jié)果的解釋
    由于有相�(dāng)多的因素會影響檢測的�(jié)果,如不同的酶標�,檢測試劑的體積,都會造成OD值的不同,因此,只有使用同一酶標板反�(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對�(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進行.[1]
    �(jié)�(gòu)
    �(guī)格有24孔板�48孔板�96孔板等多�,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對其可進行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測.
    酶標儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一�,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在微孔板的后�,聚光鏡,光欄后到達反射�,經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電�.
    從酶標儀工作框圖和光路圖上可看出,它和普通的光電比色計有以下幾點差異�
    (l)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔�.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,故用它作為固相載體.
    ⑵由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿�,因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板�,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液.
    ⑶酶標儀通常不僅用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度.酶標儀可分為單通道和多通道2種類�,單通道又有自動和手�2種之�.自動型的儀器有X,Y方向的機械驅(qū)動機�(gòu),可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試,手動型則靠手工移動微孔板來進行測量.
    在單通道酶標儀的基�(chǔ)上又�(fā)展了多通道酶標儀,此類酶標儀一般都是自動化型的.它沒有多個光束和多個光電檢測器,如 12個通道的儀器設(shè)� 12條光束或 12個光��12個檢測器�12個放大器,在X方向的機械驅(qū)動裝置的作用�,樣�12個為一排被檢測.多通道酶標儀的檢測速度�,但其結(jié)�(gòu)較復(fù)雜價格也較高.
    用�
    可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry�,酶活、酶動力�(xué)檢測,酶�(lián)免疫測定(ELISAs�,細胞增殖與毒性分�,細胞凋亡檢測(MTT�,報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析(GPCR)等

操作事項

    酶標儀的功能是用來讀取酶�(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)�(jié)果,因此要得到準確結(jié)�,試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標儀之前是通過目測判斷�(jié)�,操作過程隨意性較�,在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習(xí)�,會造成較大誤差。在酶標儀的操作中�(yīng)注意以下事項�
    使用加液器加�,加液頭不能混用�
    洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗�,避免交叉污��
    嚴格按照試劑盒的說明書操�,反�(yīng)時間準確�
    在測量過程中,請勿碰酶標�,以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手�
    請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或�(nèi)�,操作完成后請洗手�
    如果使用的樣品或試劑具有污染�、毒性和生物�(xué)危害,請嚴格按照�
    劑盒的操作說�,以防對操作人員造成損害�
    如果儀器接觸過污染性或傳染性物�,請進行清洗和消��
    不要在測量過程中�(guān)閉電��
    對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差,應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù),以達到效果�
    使用后蓋好防塵罩�
    出現(xiàn)技�(shù)故障時應(yīng)及時與廠家聯(lián)�,切勿擅自拆卸酶標儀�

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