液相色譜法就是用液體作為流動(dòng)相的色譜��1906 年俄國植物學(xué)家茨維特(M.S.Tswett)將植物色素提取液加到裝有碳酸鈣微粒的玻璃柱子上部,繼而以石油醚淋洗柱�,結(jié)果使不同的色素在柱中得到分離而形成不同顏色的譜帶,每�(gè)色帶代表不同的色�。從�,這類方法均稱為色譜法。隨著色譜技�(shù)的發(fā)�,色譜法不僅可以用于分離有色物質(zhì),而且廣泛地運(yùn)用于分離無色物質(zhì),尤其是有機(jī)化合��
液相色譜法的分離�(jī)理是基于混合物中各組分對兩相親和力的差別。根�(jù)固定相的不同,液相色譜分為液固色�、液液色譜和鍵合相色譜。應(yīng)用最廣的是以硅膠為填料的液固色譜和以微硅膠為基質(zhì)的鍵合相色譜。根�(jù)固定相的形式,液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法及薄層色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色�、離子交換色譜和凝膠滲透色�。近年來,在液相柱色譜系�(tǒng)中加上高壓液流系�(tǒng),使流動(dòng)相在高壓下快速流�(dòng),以提高分離效果,因此出�(xiàn)了高效(又稱高壓)液相色譜法�
液固吸附色譜
高效液相色譜中的一�,是基于物質(zhì)吸附作用的不同而實(shí)�(xiàn)分離。其固定相是一些具有吸附活性的物質(zhì)如硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺��
液液分配色譜�
基于被測物質(zhì)在固定相和流�(dòng)相之間的相對溶解度的差異,通過溶質(zhì)在兩相之間�(jìn)行分配以�(shí)�(xiàn)分離。根�(jù)固定相與流動(dòng)相的極性不同,分為正相色譜和反相色�。前者是用硅膠或極性鍵合相為固定相,非極性溶劑為流動(dòng)�;后者是硅膠為基�(zhì)的烷基鍵合相為固定相,極性溶劑為流動(dòng)相,適用于非極性化合物的分��
離子交換色譜�
基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的溶�(zhì)離子�(jìn)行可逆交換,依據(jù)這些離子對離子交換基具有不同的親和力而實(shí)�(xiàn)分離。薄殼型離子交換樹脂柱效高,主要用來分離簡單的混合物;多孔性樹脂�(jìn)樣容量大,主要用來分離復(fù)雜混合物�
凝膠滲透色譜法
又稱為尺寸排阻色譜法�1959年首先用于生物化�(xué)�(lǐng)�。以溶劑為流�(dòng)�,多孔填料(如多孔硅�、多孔玻璃)或多孔交�(lián)高分子凝膠為分離介質(zhì)的液相色譜法。當(dāng)混合物溶液入凝膠色譜柱后,流�(jīng)多孔凝膠�(shí),體積比多孔凝膠孔隙大的分子不能滲透到凝膠孔隙里去而從凝膠顆粒間隙中流過,較早地被沖洗出柱�,而小分子可滲透到凝膠孔隙里面去,較晚地被沖洗出來,混合物�(jīng)過凝膠色譜柱后就按其分子大小順序先后由柱中流出達(dá)到分離的目的。用凝膠滲透色譜的�(yōu)�(diǎn)是:分離不需要梯度沖洗裝�;同樣大小的柱能接受比通常液相色譜大得多的試樣�;試樣在柱中稀釋少,因而容易檢�;組分的保留�(shí)間可提供分子尺寸信息;色譜柱壽命�。它的缺�(diǎn)是:不能分離分子尺寸相同的混合物,色譜柱的分離度�;峰容量??;可能有其他保留�(jī)理起作用�(shí)引起干擾。凝膠滲透色譜法為測定高聚物分子量和分子量分布提供了一�(gè)有效的方�,此外還可用來分離齊聚物、單體和聚合物添加劑等�
離子色譜�
采用柱色譜技�(shù)的一種高效液相色譜法,樣品展開方式采用洗脫法。根�(jù)不同的分離方式,離子色譜可以分為高效離子色譜、離子排斥色譜和流動(dòng)相離子色�3�。高效離子色譜法使用低容量的離子交換樹脂,分離機(jī)理主要是離子交換。離子排斥色譜法用高容量的樹�,分離機(jī)理主要是利用離子排斥原理。流�(dòng)相離子色譜用不含離子交換基團(tuán)的多孔樹�,分離機(jī)理主要是基于吸附和離子對的形成�
離子色譜儀由淋洗液貯存�、泵、�(jìn)樣閥、分離柱、抑制柱、電�(dǎo)檢導(dǎo)器和�(shù)�(jù)處理單元等組�。離子色譜儀最重要的部件是分離�,裝有離子交換樹�。抑制柱是抑制型離子色譜儀的關(guān)鍵部件,其作用是將淋洗液�(zhuǎn)變成低電�(dǎo)部分,以降低來自淋洗液的背景電導(dǎo),同�(shí)將樣品離子轉(zhuǎn)變成其相�(yīng)的酸或堿,以增加其電�(dǎo)。分離陰離子,抑制柱填充�(qiáng)酸性陽離子交換樹脂;分離陽離子,抑制柱填充�(qiáng)堿性陰離子交換樹脂。檢測器分通用型檢測器與專用型檢測�。前者如電導(dǎo)檢測�,對檢測池中所有離子都有響�(yīng);后者如紫外-可見分光光度�(jì),對離子具有選擇性響�(yīng)�
離子對色譜法
離子對色譜法是將一種(或數(shù)種)與樣品離子電荷(A+)相反的離子(B-,稱為對離子或反離子,Counterion)加入到色譜系統(tǒng)的流�(dòng)相(或固定相)中,使其與樣品離子�(jié)合生成弱極性的離子對(呈中性締合物�。此離子對不易在水中離解而迅速�(jìn)入有�(jī)相中,從而控制溶�(zhì)離子的保留行��
�(yōu)�(diǎn)
離子色譜法具有快�、靈�、選擇性好和同�(shí)測定多組分的�(yōu)�(diǎn)。尤其對于陰離子的測定,離子色譜的出�(xiàn)是分析化�(xué)中的一�(xiàng)突破性的新�(jìn)��
�(yīng)�
離子色譜法主要用于測定各種離子含�,廣泛應(yīng)用于�、紙漿和漂白液、食品分�、生物體液、鋼鐵和�(huán)境分析等各�(gè)�(lǐng)��
高效液相色譜儀由輸出泵、�(jìn)樣裝�、色譜柱 、梯度沖洗裝�、檢測器及數(shù)�(jù)處理和微�(jī)控制單元組成。輸出泵的功能是將沖洗劑在高壓下連續(xù)不斷地送入柱系�(tǒng),使混合物試樣在色譜中完成分離過�。常用的�(jìn)樣方式有3種:注射器隔膜�(jìn)�、閥�(jìn)樣和自動(dòng)�(jìn)樣器�(jìn)�。色譜柱的功能是將混合物中各組分分離。梯度沖洗又稱溶劑程序,通過連續(xù)改變沖洗劑的組成,改善復(fù)雜樣品的分離度,縮短分析周期和改善峰�,其功能類似于氣相色譜中的程序升溫。檢測器的功能是將從色譜柱中流出的已�(jīng)分離的組分顯示出來或�(zhuǎn)換為相應(yīng)的電信號,主要有紫外吸收檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器和折光示差檢測器,其中以紫外吸收檢測器使用最�?,F(xiàn)代化的儀器都配有�(jì)算機(jī),以�(shí)�(xiàn)自動(dòng)處理�(shù)�(jù)、繪圖和打印分析�(bào)��
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