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氣相色譜層析
閱讀�3612時間�2018-06-02 10:27:19

氣相色譜層析即為混合樣品的氣流通過固定相時,根�(jù)各組分對固定相的吸附�(qiáng)弱不同使不同成分得到分離�氣相色譜儀的基本流�。利用氣相色譜層析技�(shù)做為微生物診斷的工具已成功地用于微生物的分類和鑒�。該法敏感性強(qiáng),能夠分離和檢測到毫微克的水�。它具有快速的特點(diǎn),常在數(shù)十分鐘甚至數(shù)小時就可以對傳染病做出早期診�。其�(jié)果穩(wěn)�,重�(fù)性好,但不足之處是操作中各因素不易控制,方法不易�(biāo)化等�

基本部件

  1、載� 常用的載氣主要有�、氬、氫和二氧化碳等。這些氣體一般都由高壓氣瓶供�
  2、�(jìn)樣器 氣相色譜儀可以用于分離固相、氣相和液相�(biāo)�。液相標(biāo)本采用微升注射器穿過橡皮隔片注入,氣相標(biāo)本采用特種氣相注射器注入�
  3、譜柱及加熱� 色譜柱一般由金屬或玻璃制�,通常采用的柱�2m~4m,內(nèi)�2mm,毛�(xì)管柱長度可達(dá)20m�150m,內(nèi)徑為0.2mm�
  載體一般采用惰�、多孔的固體顆粒。多由硅藻土或玻璃珠制成,分析不同極性的微生物化合物,為了獲得最適的分離條件,要求有不同固定相的載體。目前比較常用的載體有:聚乙二醇(CarbOwax 20M�、F F A P(聚乙二�20M �2-硝基對苯二甲酸的反應(yīng)�(chǎn)物),OV-17(苯基甲基硅酮)。OV-210、SE-30(甲基硅酮)、Chromosorb G(白色硅藻土載體)等。柱加熱爐在溫度控制上是非常重要�
  4、紀(jì)錄儀
  5、數(shù)�(jù)處理裝置 一般均附有�(shù)�(jù)處理計算�(jī)�

試驗條件的選�

  柱的選擇
  要注意極性及使用溫度,柱溫不能超過使用溫�。固定相按極性相似的原則選擇�
  色譜柱的�(nèi)徑大�、長度都能影響分離率。一般而言,內(nèi)徑越�,長度越長,分離效果越好,一般柱長為1m�5m(毛�(xì)管柱�20m�100m)�
  填充劑顆粒一般采�40目~60��60目~80目及80目~100目大�。長柱子宜用粒度大些�,以減少柱壓�,短柱子則用粒度�(xì)的�
  氣相色譜中固定液的含量對分離效率的影響較�。一般采用固定液與載體重量之比為15�100�25�100。采用高靈敏度的檢測�,由于�(jìn)樣量減少,固定液含量可以降至5�100以下。這樣可以使用較低柱溫,從而提高柱�,縮短分析時�。但固定液用量太少會引起吸附�
  柱溫選擇
  柱溫選擇對分離度影響很大,常是條件選擇的�(guān)鍵。選擇的基本原則是:在使最難分離的組分有盡可能好的分離高度的前提下,盡可能采取較低溫度,但以保留時間適宜及不拖尾為��
  ①高沸點(diǎn)混合物(200℃~400℃),若需在較低的柱溫下分析,可采用低固定液配�1%�3%,采用高靈敏檢測�,柱溫可比沸�(diǎn)�100℃~150�,在200℃~250℃的柱溫下分��
 ?、诜悬c(diǎn)<300℃的樣品,可�3%�25%固定液配�。沸�(diǎn)越低,所用配比越高,柱溫可比平均沸點(diǎn)�50℃至平均沸點(diǎn)的范圍選��
  載體選擇
  載體采用低線速時,宜用氮?dú)猓桓呔€速時用氫�。柱越長,柱�(nèi)有較大壓力降,宜用氫氣。載氣采用低線速時�20mL�80mL/min�
  其它條件
 ?、贇饣覝囟燃皺z測室溫度選擇:氣化溫度取決于樣品的揮�(fā)性、沸�(diǎn)、穩(wěn)定性以及�(jìn)樣量,一般選擇稍高于樣品沸點(diǎn),但不要超過沸點(diǎn)50%以上,以防分解。檢測室溫度需高于柱溫,一般高于柱�30℃左右或與氣化室同溫�
 ?、谶M(jìn)樣量:固定相在配�15%�35%的層析柱�,�(jìn)樣量液體�10μl,氣體為10mL。一般樣品量液體4μl,氣體為0.5mL�3mL,固體小�1mg�
 ?、蹣螂娢贿x擇:散熱多和選擇大的橋電�,在靈敏度相同的情況�,應(yīng)盡量選擇低橋電位,以保護(hù)熱敏元件�

填充柱的制備

  1、稱取一定量的載體于蒸發(fā)皿中,加2倍于載體體積的低沸點(diǎn)溶劑(氯仿丙酮、三氯甲烷等�,使之溶解�
  2、取適量的固定液,倒入蒸發(fā)皿中,拌勻。注意應(yīng)使載體全部覆蓋在液面�,于紅外燈下緩緩加熱,不時輕輕攪�,待溶液全部揮發(fā)�
  3、先將柱的一端用玻璃毛輕輕堵�,接上吸濾真空泵,柱的另一端接上漏�,將填充劑從漏斗加入,同時啟動真空泵,不時輕敲柱子各�,以使填充均�。裝滿后,關(guān)閉真空泵,取下色譜柱,將加樣的一端也填上一小團(tuán)玻璃毛�
  4、將柱裝入色譜柱中,在通載氣前,先將爐溫升至略高于操作溫度,保持約1h,以使固定液受熱熔化或粘度減�,在載體表面流布均勻,然后再通入載氣,使色譜柱在操作溫度下通載氣數(shù)小時�

操作方法

  1、參考儀器使用說明書,將有關(guān)�(shè)備安裝好,檢查各系統(tǒng)各接頭是否漏�,確定無誤后,可開始操作�
  2、開氣流總閥門,調(diào)節(jié)表頭上的減壓閥,使氣體壓力為22kg/cm2左右,調(diào)節(jié)�(wěn)壓器針形閥,使載
  氣流速控制在所需要的流速��
  3、設(shè)定柱� (根�(jù)儀器恒溫箱的性能控制溫度波動值在一定的范圍之內(nèi),如±0.5℃)。一般所用的柱溫是在被分析物�(zhì)的平均沸�(diǎn)左右或更低一�。若被分析物的沸程太�,則可用程序升溫法來升高柱溫�
  4、加熱�(jìn)樣器(氣化室�,使溫度高于樣品沸點(diǎn)的組分的沸點(diǎn)�
  5、加熱檢測器恒溫�,使溫度與柱溫一樣或高于一定的��
  6、氣流和溫度均達(dá)�(wěn)定后,給檢測器通電�。若采用氫火焰離子化檢測器則啟動微電流放大器部分�
  7、檢樣器為零�(diǎn),待�(wěn)定后,即可開始�(jìn)��

�(jié)果分�

  氣相色譜層析(Gas Chromatography GC)是一種分離分析的方法,它的特�(diǎn)是適合于多組分混合物的定性和定量分析�
  定�
  對于一已知范圍的混合物,用此法定性很容易,但對于范圍未知的混合物來說,則需要配合化�(xué)分析及其它儀器分析�
 ?、倮帽A糁刀ㄐ苑ǎ和环N物質(zhì)在一根層析柱上保留時間相同。取樣品各可能組分的純物�(zhì)加入樣品�,混合�(jìn)�,對比加入后的色譜圖,若某色譜峰相對譜高,則該色譜峰的組分與純物�(zhì)可能為同一物質(zhì)�
  ②化�(xué)反應(yīng)定性法:即把色譜柱的流出物,通過加入官能�(tuán)試劑�(jìn)行反�(yīng),觀察試劑的顏色是否�(fā)生變化或是否有沉淀,而判斷該組分含什么官能團(tuán)�?qū)儆诤晤惢衔�?BR>  ③兩譜聯(lián)用定性法:即�(jié)合質(zhì)譜儀、紅外分光光度計等來�(jìn)行分�、定��
  定量
  在實驗條件恒定時,峰面積或峰高與組分的含量成正比,因此可以利用峰面積或峰高面積或峰高來�(jìn)行定�。同時與�(biāo)�(zhǔn)化合物的相對保留時間�(jìn)行對�,對某化合物做出鑒定�

維庫電子�,電子知�,一查百��

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