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UV分光光度�(jì)
閱讀�5709�(shí)間:2011-06-19 15:57:02

  UV分光光度�(jì)是利用紫外可見吸收光譜法,根�(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度,來�(jìn)行藥品的鑒別、純度檢查及含量測定的測量裝�。紫外可見吸收光譜法自問世以來,在應(yīng)用方面有了很大的�(fā)�,尤其是在相�(guān)�(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)�,促�分光光度�(jì)儀器的不斷�(chuàng)�,功能更加齊�,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范��

原理

  紫外可見吸收光譜的基本原理是利用在光的照射下待測樣品�(nèi) 部的電子躍遷,電子躍遷類型有�

  �1)σ→σ* 躍遷 指處于成鍵軌道上� σ 電子吸收光子后被激�(fā)躍遷� σ* 反鍵軌道

 ?�?)n→�* 躍遷 指分子中處于非鍵軌道上的 n 電子吸收能量后向 σ*反鍵� 道的躍遷

  �3)π→π* 躍遷 指不飽和鍵中� π 電子吸收光波能量后躍遷到 π*反鍵� ��

  �4)n→π* 躍遷 指分子中處于非鍵軌道上的 n 電子吸收能量后向 π*反鍵� 道的躍遷

  � 電子躍遷類型不同,實(shí)際躍遷需要的能量不同� σ→�* �150nm n→�* �200nm π→π* �200nm n→π* �300nm

  吸收能量的次�?yàn)椋害摇?>n→�*≥π→π*>n→π*

  特殊的結(jié)�(gòu)就會有特殊的電子躍遷,對�(yīng)著不同的能量(波長),反反映在紫 外可見吸收光譜圖上就有一定位置一定強(qiáng)度的吸收�,根�(jù)吸收峰的位置和強(qiáng)度就� 以推知待測樣品的�(jié)�(gòu)信息�

操作順序

  1.接通電�� 開電腦主�(jī)�

  2.�(jìn)入控制軟件界��

  3. 選擇所用程序( Scan掃描為例 掃描為例�

  4. �(shè)置儀器參�(shù)�

  4.確定測定波長(掃描��

  5. 測定試樣�

  6.測定試��

  7.儀器復(fù)��

�(yīng)�

  物質(zhì)的紫外吸收光譜基本上是其分子中生色團(tuán)及助色團(tuán)的特征,而不是整�(gè)分子 的特�� 如果物質(zhì)組成的變化不影響生色�(tuán)和助色團(tuán)� 就不會顯著地影響其吸收光�� 如甲苯和乙苯具有相同的紫外吸收光�。另�,外界因素如溶劑的改變也會影響吸� 光譜,在極性溶劑中某些化合物吸收光譜的精細(xì)�(jié)�(gòu)會消失,成為一�(gè)寬帶。所�� 只根�(jù)紫外光譜是不能完全確定物�(zhì)的分子結(jié)�(gòu),還必須與紅外吸收光�、核磁共� 波譜、質(zhì)譜以及其他化�(xué)、物理方法共同配合才能得出可靠的�(jié)論�

  化合物的鑒定

  利用紫外光譜可以推導(dǎo)有機(jī)化合物的分子骨架中是否含有共軛結(jié)�(gòu)體系� C=C � -C=C、C=C-C=O、苯�(huán)�。利用紫外光譜鑒定有�(jī)化合物遠(yuǎn)不如利用紅外光譜� �,因?yàn)楹芏嗷衔镌谧贤鉀]有吸收或者只有微弱的吸收,并且紫外光譜一般比較簡 �,特征性不�(qiáng)。利用紫外光譜可以用來檢�(yàn)一些具有大的共軛體系或�(fā)色官能團(tuán)� 化合�,可以作為其他鑒定方法的�(bǔ)充�

 ?�?)如果一�(gè)化合物在紫外區(qū)是透明�,則說明分子中不存在共軛體系,不� 有醛�、酮基或溴和�??赡苁侵咀�?xì)浠�?、胺、腈、醇等不含雙鍵或�(huán)狀� 軛體系的化合��

 ?�?)如果在 210�250nm 有強(qiáng)吸收,表示有 K 吸收帶,則可能含有兩�(gè)雙鍵的共 軛體�,如共軛二烯� α,�-不飽和酮�。同樣在 260�300�330nm 處有高強(qiáng)� K 吸收�,在表示有三�(gè)、四�(gè)和五�(gè)共軛體系存在�

 ?�?)如果在 260�300nm 有中�(qiáng)吸收(ε=200�1 000),則表示有 B 帶吸�� 體系中可能有苯環(huán)存在� 如果苯環(huán)上有共軛的生色基�(tuán)存在�(shí)� ε 可以大于 10 000� �

  �4)如果在 250�300nm 有弱吸收帶(R 吸收帶),則可能含有簡單的非共軛� 含有 n 電子的生色基�(tuán),如羰基��

  純度檢查

  如果有機(jī)化合物在紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰,而雜�(zhì)在紫外區(qū)有較�(qiáng)的吸 �,則可利用紫外光譜檢�(yàn)化合物的純度。如果有�(jī)化合物在紫外可見光區(qū)沒有明顯 的吸收峰,而雜�(zhì)在紫外區(qū)有較�(qiáng)的吸�,則可利用紫外光譜檢�(yàn)化合物的純度�

  異構(gòu)體的確定

  異構(gòu)體的� � 對于異構(gòu)體的確定,可以通過�(jīng)�(yàn)�(guī)則計(jì)算出 λmax �,與�(shí)測值比�,即可證 �(shí)化合物是哪種異構(gòu)�。如: 乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇式互變異�(gòu)

  位阻作用的測�

  由于位阻作用會影響共軛體系的共平面性質(zhì),當(dāng)組成共軛體系的生色基�(tuán)近似� 于同一平面,兩�(gè)生色基團(tuán)具有較大的共振作用時(shí),λmax 不改�,εmax 略為降低� 空間位阻作用較小;當(dāng)兩�(gè)生色基團(tuán)具有部分共振作用,兩共振體系部分偏離共平� �(shí),λmax � εmax 略有降低;當(dāng)連接兩生色基�(tuán)的單鍵或雙鍵被扭曲得很厲害,� 致兩生色基團(tuán)基本未共�,或具有極小共振作用或無共振作用,劇烈影響其 UV 光譜 特征�(shí),情況較為復(fù)雜化。在多數(shù)情況�,該化合物的紫外光譜特征近似等于它所� 孤立生色基團(tuán)光譜的“加合��

  氫鍵�(qiáng)度的測定

  溶劑分子與溶�(zhì)分子締合生成氫鍵�(shí),對溶質(zhì)分子� UV 光譜有較大的影響。對 于羰基化合物,根�(jù)在極性溶劑和非極性溶劑中 R 帶的差別,可以近似測定氫鍵的�(qiáng) �。溶劑分子與溶質(zhì)分子締合生成氫鍵�(shí),對溶質(zhì)分子� UV 光譜有較大的影響。對 于羰基化合物,根�(jù)在極性溶劑和非極性溶劑中 R 帶的差別,可以近似測定氫鍵的�(qiáng) ��

  定量分析

  朗伯-比爾定律是紫�-可見吸收光譜法�(jìn)行定量分析的理論基礎(chǔ),它的數(shù) �(xué)表達(dá)式為: A = ε b c UV-2550

注意事項(xiàng)

  1、使用的吸收池必需潔凈,并注意配對使用。量�,移� 管均�(yīng)校正后使��

  2、取吸收池時(shí),手�(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè)盛裝樣品以池體的 4/5 為度,使 用揮�(fā)性溶液時(shí)�(yīng)加蓋,透光面要用插鏡紙由上而下?lián)犑酶蓛簦瑱z視應(yīng)無溶劑殘�。吸收池 放入樣品室時(shí)�(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈,晾干防塵保��

  3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外,其吸收度以� 0.3~0.7 之間為宜�

  4、測定時(shí)除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶液為空白對照,采� 1cm 石英吸收 �,在�(guī)定峰+-2nm 以內(nèi),測幾�(gè)�(diǎn)的吸收度或由儀器在�(guī)定波長附近自�(dòng)掃描測定,以 核對供試品的吸收峰位置是否正確, 并以吸收度的波長作為測定波長� 除另有規(guī)定吸� 度波長應(yīng)在該品種下規(guī)定的測定波長+-2nm 以內(nèi)

  5、供試品�(yīng)� 2 �,如為對照品比較�,對照品一般也�(yīng)取兩�。平行操�,每份結(jié)果對 平均值的偏差�(yīng)�+-0.5%以內(nèi)

  6、選用儀器的狹縫寬度�(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度,否則測得的吸收度會偏低,狹縫寬 度的選擇�(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為�(zhǔn)� 對于大部分被測品種, 可以� � 2nm 縫寬�

維庫電子�,電子知�,一查百��

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